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分子生物學(xué)常用實驗方法介紹

總RNA的提取（Trizol法提�。�

在收集到生物材料之后，最好能即刻進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時儲存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。

1. 提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進(jìn)行裂解；提取細(xì)胞RNA時，先離心沉淀細(xì)胞，每5-10 ╳10⁶個細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞；
2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘；
3. 在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘；
4. 取上層水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘；
5. 棄上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清；
6. 讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥；
7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。                       

PCR

實驗室常用DNA聚合酶有三種：TaKaRa Taq^TM，TaKaRa E_XTaq^TM和Pyrobest^TM DNA Polymerase。TaKaRa Taq^TM是一般的DNA聚合酶，保真性較差，但價錢便宜，一般用于基因表達(dá)的檢測等。TaKaRa E_XTaq^TM是具有Proof reading活性的耐熱性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其擴增得到的PCR產(chǎn)物3’端附有一個“A”堿基，如果希望直接將產(chǎn)物克隆到T-vector可以用此酶。Pyrobest^TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐熱性DNA聚合酶，其特點是保真性極高，擴增得到的PCR產(chǎn)物為平滑末端。如果進(jìn)行基因的擴增請使用此酶。

1. 按下列組成在PCR反應(yīng)管中調(diào)制反應(yīng)液：

TaKaRa Taq^TM或TaKaRa E_XTaq^TM的配方

Pyrobest^TM DNA Polymerase的配方

• 反應(yīng)總體積根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)控，可以做20~50µl以節(jié)約試劑；
• 將上表各成分加入到0.2ml或0.5ml滅菌的PCR薄壁管中；
• 如果不用PCR儀的加熱蓋，在反應(yīng)混合液的上層加30 ~50µl 的礦物油防止樣品在PCR的過程中蒸發(fā)；
• 按以下程序進(jìn)行PCR擴增。

PCR反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異，在實際操作中需根據(jù)具體的情況以及PCR結(jié)果而進(jìn)行優(yōu)化。

反應(yīng)結(jié)束后，抽取擴增樣品5µl，用瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結(jié)果，用DNA marker判斷擴增片段的大小或冷凍保存，以備以后分析使用。

RT-PCR

Protocol: TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)

1. 按下列組成在PCR反應(yīng)管中調(diào)制反應(yīng)液

1. 反應(yīng)總體積根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)控，可以做20~50µl以節(jié)約試劑；
2. 將上表各成分加入到0.2ml或0.5ml滅菌的PCR薄壁管中；
3. 如果不用PCR儀的加熱蓋，在反應(yīng)混合液的上層加30 ~50µl 的礦物油防止樣品在PCR的過程中蒸發(fā)；
4. 按以下條件進(jìn)行反應(yīng)

反應(yīng)結(jié)束后，抽取擴增樣品5µl，用瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結(jié)果，用DNA marker判斷擴增片段的大小或冷凍保存，以備以后分析使用。

瓊脂糖核酸電泳

1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；
2. 根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml）；
3. 放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；
4. 室溫下30~45分鐘后凝膠完全凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；
5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去；
6. 在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液（loading buffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)；
7. 接通電源，紅色為正極，黑色為負(fù)極，切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60～100V電壓，電泳20～40min即可；
8. 根據(jù)指示劑泳動的位置，判斷是否終止電泳；
9. 電泳完畢，關(guān)上電源，在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴增產(chǎn)物的大小。

膠回收純化DNA

1. 瓊脂糖電泳，將特異電泳帶用刀切下放入到EP管中，稱瓊脂糖帶的重量；
2. 按照每100mg加400µl的量加入binding buffer，放入到EP管振蕩器中，45℃～55℃溫育振蕩，直到所有的瓊脂糖都溶解（大概要5分鐘）；
3. 取出純化柱，將上述溶解液轉(zhuǎn)移至柱中，室溫下放置2分鐘，8,000rpm 離心1分鐘，棄EP管中的液體，將純化柱放回EP管中；
4. 加500µl的wash buffer至柱中，8,000rpm 離心1分鐘。棄管中的溶液；
5. 重復(fù)操作4步的操作1次，最后將純化柱放入EP管中10,000rpm離心30秒，除去痕量的wash buffer；
6. 將純化柱放入一個新的EP管。加30~40µl H₂O或者elution buffer至純化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2分鐘，10,000rpm離心1分鐘洗脫DNA，將EP管中的DNA溶液放在-20℃保存。
7. 注：若想要不電泳而直接純化DNA溶液，只需要在第2步中按100µl液量加400µl的binding buffer,其余的步驟不變。

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取（堿裂解法）

此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切PCR擴增。

1. 取1.5ml細(xì)菌培養(yǎng)物于EP管中，4000rpm離心1分鐘，棄上清液，使細(xì)菌沉淀盡量干燥；
2. 將細(xì)菌沉淀重懸于用冰預(yù)冷的100 µl溶液I (50 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L EDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0) 中，劇烈振蕩；
3. 加入200 µl新配制的溶液II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，蓋緊EP管口，快速顛倒離心管5次，以混合混合物，確保離心管的整個內(nèi)表面與溶液II接觸，不要渦旋，置于冰浴中；
4. 加入150 µl預(yù)冷溶液III(每100 ml 的溶液III中含60 ml 5 mol/L 乙酸鉀，11.5 ml冰乙酸，28.5 ml H₂O)，蓋緊EP管口，反復(fù)顛倒數(shù)次，使溶液III在粘稠的細(xì)菌裂解物中分散均勻，之后將管置于冰上3~5分鐘；
5. 在最大轉(zhuǎn)速下離心5min，取上清液于另一新EP管；
6. 用兩倍體積的乙醇室溫沉淀雙鏈DNA，振蕩混合于室溫放置2分鐘，最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘；
7. 小心吸去上清液，將離心管倒置于濾紙上，以使所有液體都流出，在將附于管壁的液滴除盡；
8. 加1ml 70％乙醇洗滌沉淀，振蕩混合，用12,000g離心2分鐘，棄上清，將開口的EP管置于室溫使乙醇揮發(fā)，直至EP管中內(nèi)沒有可見的液體存在（5～10分鐘），用適量的ddH₂O溶解；
9. 用0.5µl的RNase 37℃溫育5~10分鐘；
10. 電泳鑒定。

乙醇沉淀DNA

1. 加入1/10體積的乙酸鈉（3 mol∕L，PH=5.2）于DNA溶液中充分混勻，使其最終濃度為0.3 mol∕L；
2. 加入2倍體積用冰預(yù)冷的乙醇混合后再次充分混勻置于-20℃中15~30分鐘；
3. 12,000 g離心10分鐘，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；
4. 加入1/2離心管容量的70％乙醇，12000g離心2分鐘，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；
5. 于室溫下將開蓋的EP管的置于實驗桌上以使殘留的液體揮發(fā)至干；
6. 加適量的ddH₂O溶解DNA沉淀。

酶  切

1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內(nèi)切酶和配套Buffer。
2. 在離心管中加入如下成分：

10×Buffer  1μl

待切樣品  xμl

酶        0.5-1μl 

加水補足10μl

1. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。
2. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr，若待切樣品為PCR產(chǎn)物，則可將反應(yīng)時間適當(dāng)延長。
3. 用未酶切的質(zhì)粒作為對照，瓊脂糖電泳鑒定酶切結(jié)果。

注：當(dāng)酶切樣品用于回收而不是鑒定時，可按比例適當(dāng)加大反應(yīng)體積。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer或者通用Buffer，但要注意不能有星反應(yīng)。）

連 接

1. 連接前先電泳確定待連接載體與片段的濃度。
2. 在離心管中加入如下成分：

10×連接Buffer 1μl

待連接的樣品（膠回收產(chǎn)物或PCR產(chǎn)物，載體與片段的mol比為1∶3-5）

連接酶0.5-1μl 

加水補足10μl

1. 混勻樣品并短暫離心使樣品全部沉于管底。
2. 將離心管置于連接酶要求的溫度孵育適當(dāng)?shù)臅r間（根據(jù)不同公司的酶的要求而定，一般為22℃ 1-3hr或16℃連接過夜）。

連接完的樣品可直接用于轉(zhuǎn)化，也可放4℃冰箱短期保存。

感受態(tài)細(xì)胞的制備

1. 挑取適當(dāng)菌株的E.coli單菌落接種于2ml SOB培養(yǎng)液中，37℃搖床過夜。
2. 取0.5-1ml過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)種到50ml SOB中，18℃劇烈震蕩，直到A₆₀₀達(dá)到0.6。
3. 將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到50ml離心管中，4℃ 4,000rpm/min離心10min。同時在冰浴上配置TB溶液。
4. 棄上清，將離心管倒置于濾紙上，使培養(yǎng)液被吸干。
5. 取1ml剛配的TB溶液打散菌體沉淀，再加入15ml TB（1/3體積的起始培養(yǎng)液），冰浴10-15min，4℃ 4,000rpm/min離心10min。
6. 棄上清，沉淀重懸于4ml TB（1/12.5體積的起始培養(yǎng)液），冰浴10min。
7. 加入280μl  DMSO，緩緩滴入并輕輕搖晃，使其充分混合均勻，冰浴10min。
8. 將菌液分裝于EP管中，-80℃或液氮凍存。
9. 取兩管感受態(tài)細(xì)胞分別加入1μl無菌ddH₂O（陰性對照）和1μl純質(zhì)粒（陽性對照）進(jìn)行轉(zhuǎn)化（見后），以檢測感受態(tài)的質(zhì)量。陰性對照平板上應(yīng)該無菌落生長，陽性對照平板上菌落數(shù)目的多少顯示感受態(tài)效率的高低。

SOB的配制：

蛋白胨        20g

酵母提取物    5g

NaCl          0.58g

KCl           0.186g

100×Mg⁺⁺溶液10ml

溶解并加水定容至1L，121℃×20min高壓蒸汽滅菌

100×Mg⁺⁺溶液：  

MgCl₂﹒6H₂O

MgSO₄﹒7H₂O

溶解并加水定容至100ml，121℃×20min高壓蒸汽滅菌

TB溶液的配制：

   1M  KCl                       5ml

0.55M MnCl₂                    2ml

0.5M  CaCl₂                    0.6ml

0.1M K-Pipes(pH 6.7)             2ml

ddH₂O                         10.4ml

Total                         20ml

注：上述溶液均需高壓蒸汽滅菌處理

0.1M K-Pipes(pH=6.7)的配制：

     稱取3.02g Pipes粉末溶于80ml dd H₂O中，此時粉末不能完全溶解，用10N KOH或KOH固體調(diào)節(jié)PH值，只有當(dāng)PH接近6.7時粉末才能完全溶解，此時當(dāng)小心少量地加入KOH直至達(dá)到所需PH值。

轉(zhuǎn) 化

1. 取100μl感受態(tài)細(xì)胞于冰浴上融化。
2. 加入1μl純質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕輕吹打混勻，冰浴30 min。
3. 將菌液放入42℃水浴中熱激90秒，立即放入冰浴中2 min。
4. 加入0.9ml SOC，于37℃恒溫?fù)u床上200rpm×1hr溫育。
5. 將菌液4000rpm/min離心3min，留200μl上清將菌體打散，均勻涂布于含適當(dāng)抗生素的瓊脂平板表面，平板于37℃倒置培養(yǎng)過夜。
   1. 注：新倒的平板可于37℃培養(yǎng)箱中預(yù)先放置數(shù)小時至過夜干燥。
   2. 當(dāng)轉(zhuǎn)化的是TA克隆連接產(chǎn)物時可在菌液中加入8μl1M IPTG和40μl  20mg/ml X-gal以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。

重組子的篩選和鑒定

重組子可通過酶切進(jìn)行鑒定，也可以利用擴增引物通過PCR進(jìn)行鑒定，陽性重組子能切出所需要的片段或得到相應(yīng)片段的PCR產(chǎn)物。

1. 用牙簽挑取平板上的菌落接種于2ml含適當(dāng)抗生素的LB培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)過夜。
2. 次日取菌液0.2-0.5ml，13,000rpm×3min離心，棄上清，加入20μl  ddH₂O和20μl酚/氯仿，震蕩混勻，13,000rpm×5min離心。
3. 取上清進(jìn)行瓊脂糖電泳，加入載體質(zhì)粒DNA作為陰性對照，根據(jù)質(zhì)粒大小初步篩選重組子，重組子的泳動速度應(yīng)該慢于載體質(zhì)粒。
4. 用堿法小量制備可能是重組子的質(zhì)粒DNA。
5. 選取適當(dāng)?shù)拿�，對重組子進(jìn)行酶切分析，酶切體積均為10μl體系。酶切樣品進(jìn)行瓊脂糖電泳鑒定是否有所需片段。
6. 酶切分析正確的重組子分成兩份，一份進(jìn)行測序反應(yīng)，另外一份保種。
7. 若用PCR法鑒定，則在第2步時每個樣本取0.5-1.0μl 菌液為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，每管反應(yīng)體系最低可少至10μl，PCR產(chǎn)物電泳，能得到所需條帶的樣本進(jìn)一步提取質(zhì)粒酶切鑒定或送樣品測序。

真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

該操作以Invitrogen公司的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipofectAMINE為例，其它轉(zhuǎn)染試劑可參照各自的使用說明書進(jìn)行。

1. 在6孔板中接種1-3×10⁵細(xì)胞/孔，加入2ml完全培養(yǎng)基，置CO₂孵箱中37℃培養(yǎng)過夜。
2. 待細(xì)胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：
   1. 溶液A：將1-2μg待轉(zhuǎn)染的超純DNA稀釋到100μl無血清培養(yǎng)基中
   2. 溶液B：將2-25μl  LipofectAMINE稀釋到100μl無血清培養(yǎng)基中
3. 混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。
4. 用2ml無血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細(xì)胞，加入0.8ml無血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置CO₂孵箱中37℃孵育2-24hr。
5. 用完全培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6. 24-72hr后檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達(dá)株。

轉(zhuǎn)染細(xì)胞的穩(wěn)定篩選

1．確定抗生素作用的最佳濃度：

不同的細(xì)胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預(yù)試驗，確定抗生素對所選擇細(xì)胞的最低作用濃度。

1. 提前24小時在96孔板或24孔板中接種細(xì)胞8孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO₂孵箱中37℃培養(yǎng)過夜。
2. 將培養(yǎng)液換成含抗生素的培養(yǎng)基，抗生素濃度按梯度遞增（0, 50, 100, 200, 400, 600, 800 和1000μg/ml）。
3. 培養(yǎng)10-14天以絕大部分細(xì)胞死亡濃度為準(zhǔn),一般為400-800μg/ml,篩選穩(wěn)定表達(dá)克隆時可比該濃度適當(dāng)提高一個級別維持時使用篩選濃度的一半.

2．轉(zhuǎn)染按前面的步驟進(jìn)行。

3．轉(zhuǎn)染72小時后按1:10的比例將轉(zhuǎn)染細(xì)胞在6孔板中傳代，換為含預(yù)試驗中確定的抗生素濃度的選擇培養(yǎng)基。在6孔板內(nèi)可見單個細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)可見單個細(xì)胞分裂繁殖形成單個抗性集落，此時可用兩種方法挑選單克隆。

1. 濾紙片法：用消毒的5x5mm濾紙片浸過胰酶,將濾紙片貼在單細(xì)胞集落上10-15秒，取出粘附有細(xì)胞的濾紙片放于24孔板中繼續(xù)加壓培養(yǎng)。細(xì)胞在24孔板中長滿后轉(zhuǎn)入25cm²培養(yǎng)瓶中,長滿后再轉(zhuǎn)入75cm²培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
2. 有限稀釋法：將細(xì)胞消化下來后做連續(xù)的10倍稀釋（10^-2—10^-10），將每一稀釋度的細(xì)胞滴加到96孔板中培養(yǎng)，7-10天后，選擇單個克隆生長的孔再一次進(jìn)行克隆。

4. ELISA或Western blot檢測單克隆細(xì)胞中外源蛋白的表達(dá)情況由于不同克隆的表達(dá)水平存在差異因此可同時挑選多個克隆選擇表達(dá)量最高的克隆傳代并保種。                                                   

重組蛋白質(zhì)的表達(dá)、純化、復(fù)性和定量

按Qiagen公司的操作手冊進(jìn)行，具體步驟如下。

一、重組蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)

1. 挑取轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的單菌落，接種于3ml 選擇性LB液體培養(yǎng)基中，37 ^oC，250 rpm/min振搖培養(yǎng)過夜。
2. 次日將培養(yǎng)過夜的菌液500 μl再接種于10 ml（1:20）選擇性LB液體培養(yǎng)基中，37 ^oC，250 rpm/min振搖培養(yǎng)至光密度（OD₆₀₀=0.6）時，取1 ml樣本作為誘導(dǎo)前標(biāo)本，10000g離心1 min收集菌體沉淀，－20 ^oC凍存?zhèn)溆谩?
3. 加入1 mol/L IPTG于菌液中，使IPTG終濃度為1 mM，37^oC，250 rpm/min振搖培養(yǎng)4～5小時。取1 ml樣本作為誘導(dǎo)后標(biāo)本，同上法收集菌體沉淀，－20 ^oC凍存?zhèn)溆谩?
4. 將誘導(dǎo)前后菌體沉淀用20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重懸，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，煮沸加熱5 min，SDS聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離，考馬斯亮藍(lán)染色3小時后，脫色觀察結(jié)果。
5. 選取誘導(dǎo)成功的細(xì)菌克隆，擴大誘導(dǎo)規(guī)模，收集菌體沉淀，于－20^oC保存，準(zhǔn)備做下一步分析及純化。

二、重組蛋白質(zhì)的分離純化

重組蛋白質(zhì)的可溶性鑒定

1. 將按上法誘導(dǎo)培養(yǎng)后收集的菌體重懸于裂解液1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80^oC低溫冰箱中放置10 min。
2. 冰中解凍。
3. 在冰浴上用超聲破碎儀破菌6次，每次10 sec，間歇10 sec，電壓200-300 V。
4. 10000g，4^oC，離心20 min，取上清（為溶液A），－20^oC保存；另將沉淀用同樣裂解液1溶解（為溶液B），同樣－20^oC保存，供后繼分析使用。
5. 將上述A、B溶液和誘導(dǎo)前后的細(xì)菌進(jìn)行SDS-PAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色，比較分析重組蛋白質(zhì)的溶解性。如果誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白質(zhì)位于A溶液中，則為可溶性蛋白；如果是在B溶液中，則為非可溶蛋白。

重組蛋白質(zhì)為非可溶性蛋白（變性條件下）的分離純化

1. 將菌體沉淀溶于適量裂解液2（Lysis buffer under denaturing conditions）中，室溫下攪拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g，4 ^oC，離心30 min，收集上清液。
3. 將Ni-NTA Agarose充填柱子，并連接于Pharmarcia低壓液相層析系統(tǒng)，用5倍柱體積的裂解液2平衡Ni-NTA Agarose，調(diào)節(jié)A₂₈₀值至零線。
4. 將適量上清液上樣到Ni-NTA Agarose柱子中，并用lysis buffer沖洗至A₂₈₀值低于0.01。
5. 分別用5～10倍柱體積的清洗液1 和清洗液2（Wash buffer 1 and 2）清洗柱子，直至A₂₈₀值低于0.01。
6. 用洗脫液（Elution buffer）洗脫重組蛋白質(zhì)，在A₂₈₀值監(jiān)測下，收集出現(xiàn)峰線后含有重組蛋白的所有洗脫液。

三、重組蛋白質(zhì)的復(fù)性、凍干和定量

純化后的蛋白用梯度降低的尿素溶液緩慢透析，最終用0.01×PBS透析，透析后的蛋白質(zhì)溶液經(jīng)凍干成粉狀。以牛血清白蛋白(BSA)為標(biāo)準(zhǔn)，采用BIO-RAD公司蛋白質(zhì)定量試劑(protein assay)比色測定蛋白質(zhì)的含量。